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洁净室微生物测试方法

浏览次数:725次     发表时间:2021-11-01

  1适用范围


  适用于无尘车间沉降菌,浮游菌工作台面,工人手的微生物检测工作。


  2定义


  2.1浮游菌:悬浮在空气中的活的微生物粒子,使用专.用的仪器,通过专门的培养基,在适宜的生长条件下繁殖到可见的菌活数。


  2.2沉降菌:空气中的活的微生物粒子,通过专门的培养基,在适宜的生长条件下繁殖到可见的菌活数。


  2.3CFU:菌落形成单位colony-formingunit。


  3测试方法


  3.1试剂/培养基的配制


  3.1.1根据采样数量,按规定要求配制好0.9%生理盐水和大豆酪蛋白琼脂培养基,将配制好的培养基分装到三角瓶中胶塞密封并用白纸包好;用移液管分装0.9%生理盐水10ml至试管中胶塞密封并用白纸包好,将相应数量移液管,棉拭子包好;将平皿放入不锈钢消.毒筒中,所有物品经121℃高压蒸气灭.菌15min;


  3.1.2灭.菌结束后部分培养基倒平皿,将用于检测浮游菌、沉降菌,如非当日使用需在2~8℃低温保存。将部分培养基置于45±5℃的恒温水浴中,生理盐水管待冷却后可到无尘车间进行采样;


  3.2沉降菌采样步骤如下:


  3.2.1将培养基凝固了的培养皿按采样位置作好标记;


  3.2.2布置采样点时,应尽量避开尘粒较集中的回风口;


  3.2.3将培养皿放置在离地0.8~1.5m左右的工作台面上,揭开培养皿盖子,使培养基暴露在空气中采样30min;


  3.2.4全部采样结束后,将培养皿盖上并倒置。


  3.2.5培养皿在用于检测时,为避免培养皿运输或搬动过程造成的影响,应同时进行阴性对照试验,每次或每个区域取1个对照皿,与采样皿同法操作但不需暴露采样,然后与采样后的培养皿一起放入培养箱内培养,结果应无菌落生长。


  3.3浮游菌采样步骤如下:


  3.3.1采样前,先用消.毒剂消.毒采样器的顶盖,转盘及罩子的内外面;


  3.3.2开启浮游菌采样器,使仪器中的残余消.毒剂蒸发,时间不少于5min,并检查流量并根据采样量调整设定采样参数,每个采样点采样不少于500L;


  3.3.3布置采样点时,采样点位置应离地0.8~1.5m左右,送风口测点位置应离开送风面30cm左右;


  3.3.4用消.毒剂对手进行消.毒后,将培养皿放入转盘内,盖上多孔取样头盖子,揭开保护盖,开启浮游菌采样器进行采样;


  3.3.5采样结束后,对已采样的培养皿作上标记;


  3.3.6全部采样结束后,用消.毒剂轻轻喷射仪器内罩子的内壁和转盘;


  3.3.7培养皿在用于检测时,为避免培养皿运输或搬动过程造成的影响,应同时进行阴性对照试验,每次或每个区域取1个对照皿,与采样皿同法操作但不需暴露采样,然后与采样后的培养皿一起放入培养箱内培养,结果应无菌落生长。


  3.4工人手微生物采样按以下步骤进行:


  3.4.1将灭.菌生理盐水管作好标记;


  3.4.2用消.毒剂对手进行消.毒,取出灭.菌棉拭子,打开灭.菌生理盐水管塞子,将棉拭子浸入灭.菌生理盐中,待棉拭子湿透后,在试管壁上轻压数下,除.去过多的水分;


  3.4.3要求被检人五指并拢,将浸有灭.菌生理盐水的棉拭子在手上来回涂擦10次,将整个手掌面积涂抹到;


  3.4.4将棉拭子与手接触的部份去掉,棉拭子头掉入灭.菌生理盐水管中,送检;


  3.4.5每对一个采样点采样结束后,应用消.毒剂对手剪钳和手进行消.毒。


  3.4.6采样结束后,另取一根棉拭子,将与手接触部分去掉,棉拭子头掉入灭.菌生理盐水管中作阴性对照。


  3.5工作台面微生物采样按以下步骤进行:


  3.5.1先将灭.菌生理盐水管标记好标记号,与所取的工人手相对应;


  3.5.2实验员带上无菌手套,用消.毒剂将手,定位架进行消.毒,必要时用酒精灯烧灼定位架,加速酒精挥发;


  3.5.3选定采样位置,固定好定位架;


  3.5.4取出灭.菌棉拭子,打开灭.菌生理盐水管塞子,将棉拭子浸入灭.菌生理盐中,待棉拭子湿透后,在试管壁上轻压数下,去.除过多的水分;


  3.5.5用棉拭子在定位架内来回涂抹10次;


  3.5.6将棉拭子与手接触的部份去.除,棉拭子头掉入灭.菌生理盐水管中,送检;


  3.5.7每一个采样点采样结束后,应用消.毒剂对手,定位架和剪钳进行消.毒。


  采样结束后,另取一根棉拭子,将与手接触部分去.除,棉拭子头掉入灭.菌生理盐水管中作阴性对照。


  3.6采样后的微生物检测


  3.6.1以培养皿采样的,将培养皿倒置,于34±1℃培养24~48小时,计数;


  以采样管采样的,将采样管在超声波清洗机超声5min,混匀后在洁净工作台上将已稀释成10倍数浓度的稀释液;用已灭.菌的移液管吸取1ml稀释液注入无菌平皿中,立即倾注培养基、混匀、凝固,每个稀释度倾注2块平板,倒置34±1℃培养24~48小时,计数;


  3.7结果判定


  3.7.1工作台面菌量应≦10cfu/cm2(即≦250cfu/25cm2);


  3.7.2工人手菌量应≦300cfu/hand;


  3.7.3沉降菌数100000级应≦10个/皿;


  浮游菌浓度100000级应≦500个/m3(≦125个/250L);